Aceste tampoane pot fi utilizate pentru aplicații biologice la un pH aproape neutru
Cele trei valori pKa pentru acidul fosforic (din Manualul de Chimie și Fizică al CRC) sunt 2,16, 7,21 și 12,32. Fosfatul monosodic și baza conjugată a acestuia, fosfat disodic, sunt de obicei folosite pentru a genera tampoane cu valori ale pH-ului în jur de 7, pentru aplicații biologice, așa cum se arată aici.
Efectuarea acestui buffer este un pic mai greu decât a face bufferele TAE și TBE. Cu toate acestea, nu este extrem de greu. Pur și simplu medie. Ar trebui să dureze aproximativ 10 minute pentru a biciui acest tampon. Iată cum.
1. Decideți asupra proprietăților tampon
Înainte de a face un tampon, trebuie să știți mai întâi ce molaritate doriți să fie, ce volum să faceți și ce este pH-ul dorit. Majoritatea tampoanelor funcționează cel mai bine la concentrații cuprinse între 0,1 M și 10 M. pH-ul trebuie să fie în limita a 1 unitate pH a pKa bazei acid / conjugate. Pentru simplitate, acest calcul va fi pentru 1 litru de tampon.
2. Determinați raportul acidului la bază
Utilizați ecuația Henderson-Hasselbalch (de mai jos) pentru a determina ce raport de acid la bază este necesar pentru a face un tampon cu pH-ul dorit. Utilizați valoarea pKa cea mai apropiată de pH-ul dorit și raportul se va referi la perechea de conjugați acid-bază care corespunde acelui pKa.
Ecuația HH: pH = pKa + log ([Base] / [Acid])
Pentru un tampon de pH 6,9, [Base] / [Acid] = 0,4898
Înlocuiți [Acid] și rezolvați pentru [Base]
Molaritatea dorită a tamponului este suma [Acid] + [Base].
Pentru un tampon de 1 M, [Base] + [Acid] = 1 și [Base] = 1 - [Acid]
Prin înlocuirea acestei în ecuația raportului, de la pasul 2, obțineți:
[Acid] = 0,6712 moli / L
Rezolvați pentru [Acid]
Folosind ecuația: [Base] = 1 - [Acid], puteți calcula că:
[Bază] = 0,3288 moli / L
3. Se amestecă baza acidului și a conjugatului
După ce ați folosit ecuația Henderson-Hasselbalch pentru a calcula ce raport de acid la bază este necesar pentru tamponul dvs., pregătiți puțin sub 1 litru de soluție folosind cantitățile corecte de fosfat monosodic și fosfat disodic.
4. Verificați pH-ul
Utilizați o probă de pH pentru a confirma că pH-ul corect pentru tampon este atins. Reglați ușor, după cum este necesar, folosind acid fosforic sau hidroxid de sodiu (NaOH).
5. Corectați volumul
După atingerea pH-ului dorit, aduceți volumul de tampon la 1 litru. Apoi diluați tamponul după cum doriți. Același tampon poate fi diluat pentru a crea tampoane de 0,5 M, 0,1 M, 0,05 M sau ceva între ele.
6. Sfaturi pentru tampon
Amintiți-vă că pKa nu este ușor de măsurat la o valoare exactă. Pot exista valori ușor diferite în literatura de specialitate din diferite surse.
7. Ce ai nevoie
Pentru a face tampon, veți avea nevoie de trei substanțe, în timp ce restul materialelor sunt echipamente. Substanțele sunt fosfat monosodic, fosfat disodic și acid fosforic sau hidroxid de sodiu pentru a ajusta pH-ul.
Veți avea nevoie, de asemenea, de un pH metru și de sonde și de echipament de laborator adecvat. Acesta include un balon volumetric, cilindri gradate, pahare și bare de agitare.
În cele din urmă, veți avea nevoie de o plită.