Cum se face acest tampon imunohistochimic de colorare
Soluția tamponată cu fosfat (PBS) este o soluție tampon utilizată în mod obișnuit pentru colorarea imunohistochimică (IHC) și este adesea folosită în cercetarea biologică. PBS este o soluție de sare pe bază de apă care conține fosfat acid de sodiu, clorură de sodiu și, în unele cazuri, clorură de potasiu și fosfat de dihidrogen de potasiu.
Colorarea imunohistochimică
Imunohistochimia se referă la procesul de detectare a antigenilor, cum ar fi proteinele din celulele unei secțiuni de țesut prin utilizarea principiului anticorpilor care se leagă în mod specific la antigeni în țesuturile biologice.
Colorația imunofluorescentă a fost prima metodă de colorare imunohistochimică.
Antigenii devin vizibili când sunt conjugați cu anticorpi care utilizează coloranți de fluorescență datorită unei reacții de legare a antigenului-anticorp. Acest proces are loc atunci când este activat de lumină excitantă cu o lungime de undă specifică sub un microscop fluorescent.
Concentrațiile de osmolaritate și de ioni ale soluțiilor se potrivesc cu cele ale corpului uman - sunt izotonice.
O rețetă pentru PBS
Puteți pregăti PBS în mai multe moduri. Există mai multe formule. Unele dintre ele nu conțin potasiu, în timp ce altele conțin calciu sau magneziu .
Această rețetă este relativ ușor. Este pentru soluție stoc 10X PBS (0,1M). Cu toate acestea, puteți să faceți o soluție stoc de 1X sau să începeți cu această rețetă 10X și să o diluați până la 1X.
Întregul proces durează aproximativ 10 minute.
O opțiune pentru a adăuga Tween este, de asemenea, furnizată.
Ce veți avea nevoie pentru a face bufferul PBS
- Fosfat de sodiu monobazic (anhidru)
- Fosfat de sodiu dibazic (anhidru)
- Clorura de sodiu
- Scala și cântărește bărci
- Agitator magnetic și bara de agitare
- O probă de pH calibrată și soluții adecvate pentru reglarea pH-ului
- 1L volumetric
- Tween 20 (opțional)
Cum se face salin cu tampon fosfat (PBS)
Se cântăresc 10,9 g fosfat dibazic anhidru (Na2HP04), 3,2 g fosfat de sodiu monobazic (NaH2P04) și 90 g clorură de sodiu (NaCI).
Se dizolvă în puțin sub 1 litru de apă distilată.
Reglați pH-ul la 7,4 și faceți soluția până la un volum final de 1L.
Se diluează 10X înainte de utilizare și se reglează pH-ul, dacă este necesar.
Puteți obține o soluție PBS care conține 0,5% Tween 20 prin adăugarea a 5 ml de Tween 20 în soluția de 1L.
Sfaturi pentru a face Tampon PBS
Păstrați tamponul la temperatura camerei după ce ați făcut soluția PBS.
Reactivii non-anhidri pot fi înlocuiți, dar va trebui să recalculați masa corespunzătoare fiecăreia pentru a se potrivi cu moleculele de apă adăugate.
Utilizările de soluție salină tamponată cu fosfat (PBS)
Soluția tamponată cu fosfat are multe utilizări, deoarece este izotonică și netoxică pentru majoritatea celulelor. Poate fi folosit pentru diluarea substanțelor și este adesea folosit pentru clătirea containerelor de celule. PBS poate fi folosit ca diluant în diverse metode pentru a usca biomolecule, deoarece moleculele de apă din interiorul acestuia vor fi structurate în jurul substanței-proteine, de exemplu. Acesta va fi "uscat" și imobilizat pe o suprafață solidă.
PH-ul rămâne constant și coerent pentru a preveni distrugerea celulelor.
Filmul subțire al apei care se leagă de substanță împiedică denaturarea sau alte modificări conformaționale. Rezervoarele de carbonat pot fi utilizate în același scop, dar cu o mai mică eficacitate.
PBS poate fi, de asemenea, utilizat pentru a lua un spectru de referință atunci când se măsoară adsorbția proteinei în ellipsometrie.