Acest tampon este folosit pentru a studia mișcarea ADN-ului
Acest tampon are o rezistență ionică scăzută și o capacitate scăzută de tamponare. Este cea mai potrivită pentru electroforeza pieselor mari (> 20 kb) de ADN și va trebui înlocuită frecvent sau recirculată timp de mai mult timp (> 4 ore).
În acest sens, vă recomandăm să luați în considerare mai multe loturi ale tamponului.
Dat fiind faptul că tamponul este ușor de realizat și că etapele pot fi efectuate rapid, efectuarea mai multor loturi la un moment dat nu ar trebui să fie extrem de dificilă sau dificil de tras. Folosind instrucțiunile de mai jos, ar trebui să dureze doar 30 de minute pentru a face tamponul TAE. Iată cum:
Pregătiți o soluție stoc de EDTA
O soluție EDTA (acid etilen-diamină tetraacetic) este pregătită înainte. EDTA nu va trece complet într-o soluție până când pH-ul nu este ajustat la circa 8,0. Pentru o soluție stoc de 500 mililitri de EDTA 0,5 M, se cântăresc 93,05 grame de sare disodică EDTA (FW = 372,2). Se dizolvă în apă deionizată de 400 mililitri și se ajustează pH-ul cu hidroxid de sodiu (NaOH). Completați soluția până la un volum final de 500 mililitri.
Whip Up o soluție stoc de TAE
Se prepară o soluție stocată concentrată (50x) de TAE prin cântărirea a 242 grame de bază Tris (FW = 121,14) și dizolvarea acesteia în aproximativ 750 de mililitri de apă deionizată.
Se adaugă cu grijă 57,1 mililitri de acid glacial și 100 mililitri de EDTA 0,5 M (pH 8,0). După aceea, ajustați soluția la un volum final de 1 litru. Această soluție stoc poate fi păstrată la temperatura camerei. PH-ul acestui tampon nu este ajustat și ar trebui să fie de aproximativ 8,5.
Pregătiți o soluție de lucru a TAE
Soluția de lucru a tampon 1x TAE se realizează prin diluarea pur și simplu a soluției de stoc cu 50x în apă deionizată.
Concentrațiile finale ale solutului sunt de 40 mM. Tris-acetat și 1 mM EDTA. Tamponul este acum pregătit pentru utilizare în rularea unui gel de agaroză.
Ce ai nevoie pentru Buffer
Din moment ce facem tamponul TAE necesită doar un set rapid și simplu de instrucțiuni, numărul de materiale necesare pentru el nu este excesiv. Veți avea nevoie doar de sare disodică EDTA, bază Tris și acid acetic glacial.
Efectuarea tamponului necesită, de asemenea, un metru de pH și standarde de calibrare, după caz. De asemenea, veți avea nevoie de pahare sau baloane de 600 mililitri și 1500 de mililitri, precum și de cilindri graduali. În cele din urmă, veți avea nevoie de apă deionizată, agitați barele și amestecați plăcile.
Înfășurarea în sus
Unde intenționați să faceți tamponul - la un loc școală, un loc de muncă sau altă locație, cum ar fi casa dvs.? Verificați inventarul înainte de a începe să vă asigurați că aveți toate materialele de mai sus pentru bufferul TAE.
Dacă preferați să nu plătiți pentru materiale, este recomandată opțiunea de a face tampon în afara casei dvs. Puteți să comandați cu ușurință materialele de care aveți nevoie online sau să vizitați un magazin de specialitate pentru ei.