Măsurarea cineticii enzimelor
Ca un pic de fundal, enzimele sunt proteine care acționează ca catalizatori în reducerea cantității de energie de activare pentru ca o reacție să aibă loc. Energia de activare este energia necesară pentru a face ca reacțiile să înceapă, deoarece multe reacții nu apar foarte repede (sau apar deloc) dacă sunt posibile termodinamic.
Enzimele catalizează reacțiile specifice într-un anumit loc (cunoscut ca situsul activ) unde reactanții se leagă și reacționează pentru a genera produsele. Substraturile au site-uri active care sunt specifice numai pentru ele, astfel încât nici o altă substanță să nu se lege sau să reacționeze în același loc. Ca o cheie și o cheie, fiecare enzimă va cataliza doar o singură reacție specifică (cu câteva excepții).
Activitatea specifică este utilizată în metodele de izolare a proteinelor pentru a indica procentajul de purificare. Este important să cunoașteți această unitate când cumpărați enzime pentru a indica exact cantitatea de enzimă pură pe care o obțineți.
Când se măsoară cinetica enzimelor (viteza de reacție a unei enzime cu un substrat - sau suprafață), activitatea specifică este definită ca cantitatea de substrat pe care enzima le transformă (reacții catalizate), per mg de proteină în preparatul enzimatic, pe unitate de timp.
Un exemplu de activitate specifică ar fi:
- Activitatea specifică a enzimei izolate a fost măsurată la 150 umoli / min / mg proteină înainte de purificare și 800 umol / min / mg, după purificare.
Activitatea specifică este o măsură importantă a purității enzimelor. Loturi diferite de o enzimă pură ar trebui să aibă aceleași valori și chiar diluarea unei soluții de enzime de mai multe ori va avea valori de activitate identice identice, chiar dacă vor exista valori diferite ale activității enzimatice. Acest lucru se datorează faptului că, în calcularea activității specifice, numărul (unități / ml) și numitorul (mg / ml) sunt afectați în mod egal.
Activitatea specifică este foarte diferită de activitate, dar calculul activității specifice este în continuare dependent de valoarea activității. Aceasta înseamnă că valoarea specifică specificată a activității va depinde, de asemenea, de definiția unității enzimatice.
Loturile de enzime care au o valoare specifică a activității mai mică decât cea preconizată pot conține molecule de enzime care au devenit alterate sau amestecate cu impurități.
Factorii care afectează activitatea enzimei
Este posibil ca o enzimă să aibă valori diferite ale activității măsurate atunci când sunt măsurate în laboratoare diferite (adică diferențele reale în activitatea măsurată, diferențele nu sunt evidente cauzate de utilizarea definițiilor unității diferite).
Modul în care se efectuează o analiză (metoda de testare pentru a determina puritatea enzimelor) va influența valorile de activitate raportate. De exemplu, enzimele sunt în general mai active între temperaturile de 37 grade Celsius comparativ cu cele de 20 grade Celsius, deci dacă se efectuează o analiză la 21 de grade Celsius, valorile vor diferi de testele efectuate la o temperatură de 32 grade Celsius , testele sunt efectuate la o temperatură între 20-37 grade Celsius).
Astfel, definiția unității de enzimă ar fi mai bine exprimată ca 1 unitate (U) este cantitatea de enzimă care catalizează reacția de 1 nmol substrat per minut în condiții standard.