Cum se poate îngheța o cultură bacteriană (liofilizare)

Liofilizarea sau uscarea prin îngheț este o procedură de laborator scurtă

Liofilizarea, denumită și liofilizare sau criodecizare, este procesul de îndepărtare a apei dintr-un produs după ce este înghețat (și apoi plasat sub vid), permițând schimbarea gheții dintr-un solid în vapori, fără a trece printr-o fază lichidă. Gheața (sau alți solvenți congelați) sunt îndepărtați dintr-un produs prin procesul de sublimare și moleculele legate de apă sunt îndepărtate prin procesul de desorbție.

Bazele liofilizării

Una dintre cele mai bune modalități de a stoca o cultură bacteriană, fungică, drojdie sau alte microorganisme pentru perioade lungi de timp este utilizarea procedeului de uscare prin înghețare. Această procedură scurtă de laborator poate fi efectuată cu orice uscător cu congelare disponibil în comerț, care vă va păstra colecția de culturi. Deoarece liofilizarea este cea mai complexă și mai costisitoare formă de uscare, procesul este limitat de obicei la materiale delicate, sensibile la căldură, de mare valoare. Substanțele care nu sunt afectate de congelare pot fi, de obicei, liofilizate, astfel încât depozitarea în refrigerare să nu fie necesară.

Acest proces poate dura mai puțin de trei ore și până la 24 de ore, fără a include timpul de creștere a culturii.

Procesul pas cu pas al liofilizării

1. Mai întâi, cultivați o cultură peste noapte, sau gazon, a microorganismului pe LB sau pe altă plăcuță adecvată cu agar nutritiv.

2. Apoi, pregătiți flacoanele sterile cu capsulă crimpă prin autoclavare înainte de timp, cu capacele (dopurile de cauciuc) plasate în partea de sus. Plasați etichetele de hârtie tipărite cu identificarea culturii în interiorul tuburilor înainte de autoclavare. Alternativ, utilizați tuburi cu capace concepute pentru sterilitate .

1. Se adaugă 4 ml de soluție tampon de liofilizare pe placă. Dacă este necesar, celulele pot fi suspendate utilizând o tijă de sticlă sterilă.

2. Se transferă rapid suspensia de cultură în flacoanele sterilizate. Se adaugă aproximativ 1,5 ml pe flacon. Sigilați cu capacul din cauciuc.

3. Se îngheață suspensia de cultură în interiorul flacoanelor prin plasarea flacoanelor într-un congelator de -20 grade Celcius.

1. Odată ce culturile sunt înghețate, pregătiți uscătorul prin înghețare, lăsându-l să funcționeze și permițând stabilizarea timpului adecvat pentru condițiile de temperatură și vid. Faceți acest lucru conform instrucțiunilor producătorului pentru marca specială de îngheț-uscător pe care o utilizați.

2. Îndepărtați cu grijă și aseptic capacele flaconului în partea superioară a flacoanelor, pentru a evita umezeala în timpul procesului de uscare prin congelare și așezați flacoanele într-o cameră de uscare prin congelare. Aplicați vacuumul în cameră conform instrucțiunilor producătorului.

3. Permiteți culturii să se liofilizeze complet (se usucă). Acest lucru poate dura de la câteva ore până la noapte, în funcție de volumul fiecărui eșantion și de câte eșantioane aveți.

4. Scoateți eșantioanele din camera de congelare conform instrucțiunilor producătorului și sigilați imediat flacoanele cu capacele de cauciuc, apoi cu vârfurile crimpate.

5. Depozitați colecția de culturi liofilizate la temperatura camerei.

Produsele de care aveți nevoie

• Liofilizator
• Nutrient sau alte plăci adecvate de agar (și incubator pentru cultivarea culturii)
• Tijă de sticlă
• Tampon de liofilizare
• Flacoane cu dop de vârf, cu dopuri din cauciuc (și un șurub pentru aplicarea capacelor)
• Congelator

<sub>Referinţă:

SP Scientific. Principii de bază ale uscării prin congelare. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/</sub>