Elementele de bază ale culturilor prin liofilizare (liofilizare)
Liofilizarea, cunoscută și sub denumirea de uscare prin înghețare, este un procedeu utilizat pentru conservarea materialului biologic prin îndepărtarea apei din probă, ceea ce presupune mai întâi înghețarea probei și apoi uscarea ei, sub vid, la temperaturi foarte scăzute. Probele liofilizate pot fi stocate mult mai mult decât probele netratate.
De ce se folosește liofilizarea
Liofilizarea sau uscarea liofilizată a culturilor bacteriene stabilizează culturile pentru depozitarea pe termen lung, reducând în același timp daunele care pot fi cauzate de uscarea probelor.
Multe microorganisme supraviețuiesc bine atunci când sunt liofilizate și pot fi ușor rehidratate și cultivate în mediu de cultură, după perioade prelungite de timp în depozitare.
Liofilizarea este de asemenea folosită în industriile biotehnologiei și biomedicale pentru conservarea vaccinurilor, a probelor de sânge, a proteinelor purificate și a altor materiale biologice.
Această procedură scurtă de laborator poate fi utilizată cu orice uscător cu congelare disponibil în comerț pentru a vă păstra colecția de culturi.
Procesul de liofilizare
Procesul de liofilizare este de fapt o aplicație a unui fenomen fizic numit sublimare: trecerea unei substanțe de la o stare solidă la o stare gazoasă, fără a trece mai întâi prin faza lichidă. În timpul liofilizării, apa din proba înghețată este îndepărtată ca vapori de apă, fără a dezgheța mai întâi proba.
Greșeli comune
Una dintre cele mai frecvente greșeli când vine vorba de liofilizare nu este cunoașterea punctului de topire a probei, ceea ce face dificilă alegerea unui liofilizator corect.
Mostrele dvs. se pot topi în timpul procesului. O altă greșeală obișnuită este că gândirea mai rece este mai bună atunci când se usucă prin înghețare pe un uscător cu congelator tip raft. În timpul uscării primare, trebuie să setați temperatura raftului chiar sub temperatura eutectică a probei. Ar trebui să existe suficientă căldură pentru a încuraja moleculele probei să se miște - dar să împiedice topirea.
A treia greșeală este folosirea echipamentului greșit pentru probele dvs. Deoarece aparatele de uscare prin congelare sunt utilizate într-o setare de grup, ar trebui să știți următoarele înainte de a cumpăra unul:
- Câtă umiditate va fi liofilizată
- Ce este eșantionul (și temperatura eutectică)
- Cum să utilizați în mod corespunzător uscătorul cu congelare
Dacă unitatea nu este utilizată corect, ar putea ruina toate probele. Ceea ce ne aduce la o altă greșeală obișnuită: nu menținerea pompei de vid. Pompa trebuie să fie în stare de funcționare excelentă pentru ca liofilizarea să funcționeze. Rularea pompei cu balastul de gaz deschis cu 30 de minute înainte și după procesul de uscare prin congelare va crește durata de viață a pompei. Deschiderea balastului de gaze curăță contaminanții din pompă pentru a preveni deteriorarea componentelor interne. Ar trebui să verificați uleiul pompei de deseori pentru decolorare și particule și să schimbați uleiul după cum este necesar. Schimbările regulate ale uleiului mențin pompa tragând la vid optim în timpul procesului de uscare prin congelare.
În cele din urmă, având accesoriile greșite de uscare prin înghețare pentru procesul dvs. de liofilizare poate fi, de asemenea, o mare greșeală. Ai nevoie de un eșantion de oprire sub vacuum? Apoi este necesară o cameră de oprire. Ești înghețată în baloane? Apoi asigurați-vă că aveți o cameră de uscare cu porturi.
Evitând greșelile de mai sus, puteți să vă asigurați mai bine îngrijirea lichidului și a pompei și să aveți probe mai bune atunci când se face uscarea prin îngheț.
Referințe
Știri Labconco. "Top 5 greșeli făcute în procesul de liofilizare." http://www.labconco.com/news/top-5-lyophilization-mistakes